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T细胞在胸腺中成熟，之后分化成具有不同功能的各种细胞亚型。这些T细胞亚型是按细胞表面分化抗原蛋白的不同来区分的，最常见的是CD45、CD3、CD4和CD8。CD45在所有白细胞( WBC)上都有表达。该标记在T细胞活性中起着至关重要的作用，并被用作区分功能T细胞的确认标记。
从健康供体白细胞中分离T细胞通常使用免疫磁珠分离的方法，分为阳性或阴性分选。
⦁ 阳性分选（PS）：用磁珠锁定所需的细胞进行分离。操作简单快速，目标细胞产量高。
⦁ 阴性分选（NS）：将不需要的细胞类型标记移除，从而得到目标细胞。尽管阴性选择可能导致T细胞产量降低，但它仍然是避免T细胞激活的首选分离方法。
免疫磁珠分离后，用流式细胞术检测人T细胞的纯度和活力。对所有样本进行血清学检测和传染病筛查。冷冻保存的人类T细胞在Cryostor CS10 (BioLife Solution, Seattle, WA)中冷冻，运输时使用液氮进行保存。
图1：来自不同分离的人T细胞亚型人群的代表性数据集，分离后T细胞纯度分别为96.75% CD3表达(pan T细胞)、95.78% CD4表达(辅助性T细胞)和96.54% CD8表达(细胞毒性T细胞)。
图2：CD3+细胞占总白细胞产量的百分比。CD4和CD8细胞在CD3+细胞总量的百分比。其中同供体反复召回5次，不同批次CD4/CD8比值基本稳定。
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